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几丁质的测定

发布时间:2018-12-19 09:39 类别:几丁质

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  几丁质的测定_农学_农林牧渔_专业材料。引见了虫豸几丁质测定的常规方式~~

  尝试一 体壁几丁质定性定量阐发 几丁质(Chitin)是高分子的含氮多聚糖,分子式为(C8H1305N)n,具有于体壁的原表皮和发源 外胚层的器官内膜中, 是虫豸表皮的次要成分之一 占表皮干重的 25% ~ 40%,由 N-乙酰-D, 葡萄糖胺通过β -1,4-糖苷键聚合而成,机关雷同纤维素。几丁质为无色无定型固体,不溶 于水、稀酸、稀碱、酒精和乙醚等无机溶剂。但在高温(160℃)下用浓碱液处置几丁质,虽 然不克不及消融,但可使其分子链上乙酰基部门手开,构成几丁糖(Chitosan),而几丁糖溶于稀 酸中,一般通过此方式来进行几丁质的定性定量测定。最 近,X 衍射阐发研究发觉虫豸表 皮中的几丁质属于 a-几丁质。 本尝试的目标和要求是检测虫豸体壁的表皮中有无几丁质的具有以及定量测定表皮中几丁 质的含量,为研究虫豸在发展发育过程中几丁质含量的变化,同时还能够研究生 长调理剂 类农药对虫豸几丁质感化的影响。 一、道理 几丁质在高温(160℃ )和碱感化下分化成几丁糖,几丁糖经碘和稀酸感化后呈现紫色,以 此来定性定量阐发虫豸表皮几丁质。 二、材料、仪器设备及试剂 (一)尝试材料 鱗翅目幼虫或直翅目若虫表皮以及各类虫豸卵。 (二)仪器设备 阐发天平、电炉、剖解针、铰剪、试管、滤纸、培育皿、烧杯、玻璃管、橡皮塞等。 (三)试剂 1.饱和氢氧化钾溶液:称取 16g 氢氧化钾溶于 100mL 水中。 2.无水乙醇以及设置装备摆设的 95%,70%,50%,30%乙醇溶液。 3.0.03%碘化钾-碘溶液:30mg 碘和 5g 碘化钾溶于 100mL 水中。 4.1%和 75%硫酸溶液。 三、操作法式 (一)几丁质定性阐发 1.便宜消化管:取试管一根,配以橡皮塞,在橡皮塞上钻 5 mm 孔,插上玻璃管,橡皮塞 外端的玻璃管上再毗连一根橡皮管,长 30?50 cm,橡皮管的另一端再接一根玻璃管,并 将启齿的玻璃管通入水槽内,以防加热时碱液溅出(见图 1)。 图 1 消化管 1.表皮 2.氢氧化钾溶液 3.橡皮塞 4.橡皮管 5.盛水的烧杯 2.取鱗翅目幼虫表皮或其他虫豸表皮或卵,别离放入装有 8 mL 饱和氢氧化钾的上述试管 中,塞紧带有橡皮管的橡皮塞,置于甘油浴中加热至 160℃,连结 15?20 min,因为体壁 的大部门组织在高温下被强碱消化,几丁质上乙酰基被脱去,剩下通明薄膜状的几丁糖。 3.将各消化管内未消化的物质倒入小培育皿中 并用镊子将其逐渐移入到 95%, , , 70% 50% 和 30%乙醇溶液清洗,再用蒸馏水冲刷待用。 4.取一块消化后的虫豸体壁(几丁糖),置于白瓷板上,加 1?2 滴 0.03%碘化钾-碘溶液, 再加 1~2 滴 1%硫酸,几丁糖当即发生紫褐色反映,如再加上几滴 75%硫酸, 稍待顷刻, 紫色变淡,直至消逝,表白几丁糖已在浓硫酸感化下完全水解。 (二)几丁质定量阐发 1.取鱗翅目幼虫(如:棉铃虫 5 龄幼虫)数组,每组 3~5 头,用水清洗体表,剪去头部、 尾部和足,再沿着腹部中线剪开,剔除附着于体壁内的肌肉和脂肪体,用水冲刷清洁, 再经 95%,100%乙醇脱水,取体壁约 300mg 在阐发天平上称重。 2.将已知质量的体壁粉末放入消化管中,按照上述方式装入消化管,在氢氧化钾饱和溶液中 加热消化。 3.将消化后残剩的几丁糖薄膜细心地倒在滤纸上 用迟缓的流水冲刷清洁 然后用 95% 100% , , , 乙醇脱水,称重。 四、成果计较 按照如下公式计较体壁几丁质的相对含量。 体壁几丁质的相对含量=W1/W2×1.26×100 ( % ) 式中:W1——消化后体壁质量,mg; W2——消化前体壁质量,mg; 1.26——转换系数,转换系数=乙酰胺基葡萄糖相对分子质量/胺基葡萄糖相对分子质 量。 消化前体壁质量(mg) 反复一 反复二 反复三 平均值 消化后体壁质量(mg) 体壁几丁质相对含量

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